滋阴益气活血复方对糖尿病大鼠血流动力学改变的影响
Effect of Composite Ziyin Yiqi Huoxue Decoction 
on Hemodynamics of Rats with Diabetes

易法银，田雪飞，陈大舜，邓奕辉，胡芳林
Yi Fayin, Tian Xuefei, Chen Dashun, Deng Yihui, Hu Fanglin
(湖南中医学院科技处，湖南长沙410007)
(Technological Department, Hunan College of TCM, Changsha Hunan 410007)

　　摘要：目的：观察滋阴益气活血复方对糖尿病大鼠肾功能及血流动力学改变的影响，并初步探讨其作用机理。方法：随机把实验动物分成滋阴益气活血复方组、模型组、西药对照组和正常对照组，并观察β₂MG、Cr、NOS、ET、BS、尿量等指标。结果：滋阴益气活血复方能有效地降低β₂MG的排泄量，降低血Cr(P<0.05)；使早期糖尿病大鼠血NOS、ET增高的状态得到改善(P<0.05)。结论：以滋阴益气活血为法对于防治糖尿病肾病具有一定的疗效。其作用机制是通过降低NOS、ET等以改善血液流变学异常，从而改善肾小球的高滤过状态，达到防治糖尿病肾病的目的。
　　关键词：滋阴益气活血复方；糖尿病肾病；血流动力学
　　Abstract: Objective: To observe the effect of composite Ziyin Yiqi Huoxue decoction (composite decoction) on renal function and hemodynamics of rats with diabets, and primarily investigate its mechanism.. Method: The lab animal were randomly divided into composite decoction group, model group, control group with Western medicine, and normal control group. The indexes such as β 2MG, Cr, NOS, ET, BS and urine volume etc. were observed. Result: Composite decoction can effectively decrease the excretion volume and blood creatinine (P<0.05), and can also effectively change the high－ state NOS,ET of rats with early diabetes (P<0.05). Conclusion: The nourishing yin and promoting blood method has some effect in preventing and curing diabetic neuropathy. Composite decoction can improve abnormal blood rheology by decreasing NOS,ET, and change the high filtration state, consequently to achieve the goal of protecting diabetic neuropathy.
　　Key words: Composite Ziyin Yiqi Huoxue decoction; Diabetic neuropathy; Hemodynamics

　　糖尿病肾病的发生及发展是多因素综合作用的结果，其中糖尿病造成血流动力学改变，是造成糖尿病肾病的重要因素之一，而因此造成的肾小球高滤过状态则在其中起关键作用。本研究通过动物模型，观察滋阴益气活血复方对糖尿病大鼠肾功能及血流动力学改变的影响，并初步探讨其作用机理。
1　材料与方法
1.1　动物模型制作
　　选用雄性Wistar大鼠(体重170g～210g，湖南中医学院动物实验中心提供)，饲以蛋白含量为21％的标准饲料，自由饮水。链脲佐菌素(美国Sigma公司产品)临用前用0.1mol/L柠檬酸缓冲液(pH4.5)新鲜配制，微孔滤膜过滤除菌。动物禁食10h后，按55mg/kg剂量一次性腹腔注射STZ，72h后测血糖，大于13.8mmol/L者选定为模型动物。
1.2　方法
1.2.1　分组　对照组12只，造模前随机选择12只健康正常大鼠为正常对照组，普通标准饲料，自由饮水。造模后选定的模型动物随机分为模型组、西药对照组、滋阴益气活血复方组。
1.2.2　给药　滋阴益气活血复方由熟地、山茱萸、黄芪、枸杞、丹参、牛膝等药物(均购自湖南中医学院附属一医院)组成，煎煮后过滤浓缩，含生药0.81g/mL。西药对照组给药依那普利(佛山康宝顺药业有限公司出品，批号：AM1267)，剂量参照说明书。模型组及正常组用生理盐水。四组均按照1mL/100g剂量灌胃，6周后处死。
1.3　指标测定
　　处死前禁食12h，采用代谢笼收集24h尿液，记录尿量，将尿液离心后取1mL于－20℃下保存，待测Cr、β₂MG(药盒购自海南华美生化有限公司)。动脉插管取血，置于冰浴，1mL用EDTA抗凝制备血浆，混匀，于－20℃下保存，待测ET(药盒购自天津天资商贸有限公司)。其余动脉血4℃离心，取上清液于－20℃保存，待测NOS、GSP(药盒购自南京建成生物制品有限公司)、Cr。测定体重、肾重及肾重/体重比值。血糖采用血糖仪(北京怡成电子有限公司)检测。Cr用日本产日立7170A生化分析仪检测，其余测定方法均参照试剂盒说明书。
1.4　统计学处理
　　采用方差分析，组间比较采用q检验，数值均采用X±S表示。
2　结果
2.1　一般情况、血肌酐值及尿β₂MG
　　链脲佐菌素造模后，动物表现为活动量减少、饮食增加、饮水及小便排泄量增多等症状，血糖值升高。经治疗后复方组尿量明显低于模型组(P<0.01)，与西药对照组比较无明显差异，但未降至正常组水平。肾重/体重比值复方组显著低于模型组(P<0.05)，但高于正常组。经统计学处理，治疗后复方组、西药对照组、模型组血糖无显著性差异。与模型组相比较，复方组、西药对照组降低血Cr、尿β₂MG排泄量有显著性差异(P<0.05)，其中尿β₂MG排泄量仍高于正常组。见表1。

表1　血糖、肾重/体重、尿量、血Cr、尿β₂MG测定结果

　　经q检验，与正常组比较，※P<0.05，※※P<0.01；与模型组比较，▲P<0.05，▲▲P<0.01。
2.2　血清NOS、血浆ET
　　注射链脲佐菌素后NOS、ET均出现增高，经治疗6周后，复方组、西药对照组均出现降低，显著低于模型组(P<0.05)，并与正常组比较无显著性差异。见表2。

表2　血清NOS、血浆ET测定结果

　　经q检验，与正常组比较，※P<0.05，※※P<0.01；与模型组比较，▲P<0.05，▲▲P<0.01。
3　讨论
3.1　以滋阴益气活血为法对于防治糖尿病肾病具有一定疗效
　　本实验结果表明，注射链脲佐菌素后动物皆出现糖尿病“三多一少”的典型症状，模型组动物体重明显减轻，而且出现肾脏体积的增大，尿蛋白排泄量增加，血Cr增高。尿β₂MG是糖尿病肾病早期诊断的敏感指标，能较好地反映肾脏受损的程度^〔1，2〕。经治疗后，与模型组相比肾脏功能有明显改善，β₂MG排泄量显著下降，肾重/体重的比值减小，但未调整至正常组水平，且无明显调整血糖的作用。提示滋阴益气活血法对于防治糖尿病肾病有一定防治作用，其作用途径也并非通过直接降低血糖而发挥作用。
3.2　滋阴益气活血法防治糖尿病肾病的机制探讨
　　DN的过程在早期的病理变化主要为肾小球的高灌注与高滤过率状态，从而产生蛋白尿。肾小球高压的结果，使肾小球系膜细胞产生TGF－β(转化生长因子－β)，尤其是TGF－β₁亢进，其结果将使细胞外基质增加，引起肾小球系膜范围扩大^〔3〕。在注射STZ后出现NOS与ET升高，说明NO、ET是引起肾小球血流动力学异常的重要因素，近来的研究结果也认为NO增加可能是糖尿病早期肾脏高灌注、高滤过的重要原因^〔4，5〕，有合并症的Ⅱ型糖尿病患者ET水平较无合并症的患者要高^〔6〕。由于NOS利用L－精氨酸合成NO，故通过降低NOS、ET以改善血液流变学异常，从而达到保护肾小球的作用，降低β₂MG排泄量，是复方防治本病的重要机制之一。依那普利是治疗糖尿病肾病的血管紧张素转换酶抑制剂药物，对于调整肾小球高灌注状态有良好效果，本研究也证明了依那普利在DN早期具有降低NOS、ET的作用。
　　瘀血是贯穿DN病程的关键病理因素。通过对大量文献的统计综合，发现DN的治疗法则大致有以下几类：益肾活血化瘀法、健脾益肾法、泻浊化瘀法、滋阴活血法、温阳行瘀法、益气活血利水法等。这些治疗法则的一个共同特点便是治疗瘀血，这充分说明了瘀血在DN发病过程中的重要性。在扶正补虚的基础上活血祛瘀，辨证辨病结合当是DN的治疗原则，本复方在滋阴益气基础上加用活血化瘀药物，正符合这一治疗原则，故收效较好。
参考文献
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(收稿日期：2000－03－28)