用正交试验法对银杏舒通口服液醇提取工艺的探讨※
湖南长沙市第一医院 (410005) 袁铁流 邵国强△ 杨 瑛△
关键词 银杏舒通口服液 槲皮素 Hplc 正交表
银杏舒通口服液处方由银杏叶、何首乌、女贞子、丹参、杜仲、川牛膝、钩藤组成。临床用于治疗肝肾阴虚与轻度脑动脉硬化症。银杏叶含双黄酮，女贞子含齐墩果酸，丹参含丹参素，均为脂溶性成分，均用醇提。银杏叶为本文处方中君药，槲皮素为其主要代表成分，因处方中其它药材对槲皮素的Hplc法测定有干扰，故选择单味银杏叶考察其提取最佳工艺，现将结果报告如下。
1 仪器与试剂
Hplc色谱仪(日本岛津)、Lx－3A数字自动处理机，槲皮素对照品由中国药品生物制品检定所提供，甲醇为色谱纯，其它试剂均为分析纯。
2 色谱条件
用十八烷基硅烷键合硅胶为填料，甲酸－0.4％磷酸水溶液为流动相(50∶50)，检测波长360nm，流速1ml/min。标准曲线制备：精密称取槲皮素对照品，加甲醇溶解，制成浓度为5.16ug/ml的标准溶液，照色谱法(95版药典)项下Hplc法，分别进样2、4、6、8、10、12ul，读出峰面积；以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，得出标准曲线。见表1。
表1 进样量与峰面积表
| 进样量(ul) |
2 |
4 |
6 |
8 |
10 |
12 |
| 峰面积 |
5273.5 |
12169 |
18097 |
25481 |
30548 |
37203 |
回归方程为Y=615084.4X－754.933
相关系数r=0.9992
3 标准溶液的制备
称取银杏叶粗粉7.5g，按以下正交表操作，回收乙醇至无醇味，加热水溶解3次，每次10ml，合并水溶液，滤过，滤液定容至50ml，吸取5.0ml，水浴蒸干，加5％盐酸与甲醇液的混合液(10∶10)回流1hr，回收甲醇后加醋酸乙酯20ml溶解，用水洗3次(15，15，10ml)，弃去水液，醋酸乙酯液蒸干，残渣加甲醇溶解，定容25ml。
4 因素水平安排
根据预试验结果，醇浓度、加醇量与提取时间为影响醇提工艺主要因素，前因素三个水平，以槲皮素含量为检测指标，安排如下：
表2 因素水平表
| |
(A) |
(B) |
(C) |
| 水平 |
醇浓度(％) |
时间(hr) |
加醇量(ml) |
| 1 |
60 |
1.5，1.0，1.0 |
38，38，38 |
| 2 |
70 |
1.5，1.5，1.0 |
75，75，38 |
| 3 |
80 |
2.0，1.5，1.0 |
112，75，75 |
5 正交试验安排及结果
见表3。
表3 正交试验安排与结果
| 因子 |
A |
B |
C |
D |
|
| 水平 |
醇提浓度(％ ) |
醇提时间(h) |
加醇量(ml) |
空白 |
槲皮素％(ug/ml) |
| 1 |
1(60) |
1(5， 1.0， 1.0) |
1(38， 38， 38) |
1 |
41.66 |
| 2 |
1(60) |
2(1.5， 1.5， 1.0) |
2(75， 75， 38) |
2 |
43.23 |
| 3 |
1(60) |
3(2.0， 1.5， 1.0) |
3(112， 75， 75) |
3 |
45.25 |
| 4 |
2(70) |
1(1.5， 1.0， 1.0) |
2(75， 75， 38) |
3 |
43.05 |
| 5 |
2(70) |
2(5， 1.5， 1.0) |
3(112， 75， 75) |
1 |
45.94 |
| 6 |
2(70) |
3(0， 1.5， 1.0) |
1(38， 38， 38) |
2 |
48.69 |
| 7 |
3(80) |
1(1.5， 1.5， 1.0) |
3(112， 75， 75) |
2 |
43.78 |
| 8 |
3(80) |
2(1.5， 1.5， 1.0) |
1(38， 38， 38) |
3 |
47.12 |
| 9 |
3(80) |
3(2.0， 1.5， 1.0) |
2(75， 75， 38) |
1 |
CT=18088.4567 |
| SⅠ |
16936.4196 |
16509.6801 |
18254.7121 |
18149.4784 |
|
| SⅡ |
18955.7842 |
17937.2449 |
17795.5600 |
18414.49 |
ΣM2－ 18126.8933 |
| SⅢ |
18403.6356 |
19897.9236 |
18216.9009 |
17704.9636 |
|
| SSi |
10.1558 |
26.4928 |
0.0402 |
1.1873 |
SS总 =38.4396 |
6 统计学处理
见表4。
表4 方差分析结果
| 方差来源 |
离差平方和 |
自由度 |
方差 |
F值 |
显著性 |
| A |
10.1558 |
2 |
5.0079 |
8.5530 |
|
| B |
26.4928 |
2 |
13.2464 |
22.3112 |
※ |
| C |
0.0602 |
2 |
0.0301 |
|
|
| D |
1.1873 |
2 |
0.5973 |
|
|
7 结论
(1)查F表可知，因素B有显著性意义，即醇提时间对醇提工艺影响最大，即以槲皮素为指标，本工艺最佳路线为A1B3C1，即加5倍乙醇量，浓度为70％，醇提时间分别为2.0、1.5、1.0hr为最佳醇提工艺。
(2)银杏叶为方中君药，与本产品用途有关的主要有双黄酮类成份，由于制剂中阴性有干扰(0.01－0.06ug/ml范围内)，无法对槲皮素定量，故采用Hplc法。
(3)用科学的方法，先进的检测手段，为中药复方制剂工艺研究与质量控制的制定，提供了可靠而科学的论据。
(修回日期：1999年4月27日) |